零内毒素质粒中量提取试剂盒

质粒中量抽提试剂盒是一种用于从大肠杆菌中进行中量质粒快速抽提的柱式试剂盒。

商品名称：零内毒素质粒中量提取试剂盒
商品编号： RTBR23-051

所属分类：

零内毒素质粒中量提取试剂盒

产品咨询：

025-85800066

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产品描述
产品说明

产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
RTBR23-051	零内毒素质粒中量提取试剂盒	25次	180.00元

包装清单：

产品编号	产品名称	储存	包装
1	P1	4℃	210ml
2	P2	室温	210ml
3	P3	室温	210ml
4	质粒DNA结合液	室温	210ml
5	质粒DNA洗涤液1	室温	55ml
6	质粒DNA洗涤液2	室温	23 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇
7	质粒DNA洗脱液	室温	10ml
8	RNase A (溶液)	4℃	2*1ml+0.6ml
9	内毒素去除柱	室温	25
10	5号柱PS套装	室温	25
11	注射器套装及废液收集管	室温	25套

保存条件：

室温保存，一年有效。
产品特点:

独有的显色反应，可以直接观察到细胞裂解中和的程度，极大方便操华牛世纪判断其状态。
快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好，且内毒素含量极低(≤0.05EU/µg)，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、转染、体内细胞等各种敏感的分子生物学实验。
此产品仅供科研使用。

注意事项:

环境温度低时溶液 P2 中 SDS 可能会析出沉淀，可在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
溶液P3和结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
菌液OD值在3-4之间，进行质粒DNA提取内毒素可低至(≤0.05EU/µg)
可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、转染、体内细胞等各种敏感的分子生物学实验。

特性:

DNA 纯度: 获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序转染等各种分子生物学实验。一般情况 Abs260/280 ≥ 1.8 ，Abs260/230 ≥ 2.0，内毒素含量≤0.05EU/µg 。
质粒 DNA 产量: 每次可提取到约 100µg ~300µg ，主要依据质粒的拷贝数，培养物的成长环境等因素。
质粒 DNA 大小: 最高可达 200 kb。（片段长度不同与菌种相关）。
洗脱体积: ≥ 200 µl。
操作温度: 室温 (15-30°C)。
操作时间：20 分钟

溶液制备:（使用之前需要配制）

第一次使用时，将试剂盒所带的全部 RNase A 加入溶液 P1 后（终浓度 120ug/ml）置于 2-8℃保存。如果溶液 P1 中 RNase A 失活，提取的质粒可能会有微量 RNA 残留，在溶液 P1 中补加 RNase A 即可。试用装的 P1 已添加过 RNaseA

操作步骤:

1. 取 50 ml 过夜培养的菌液，在≥ 3,400 x g 离心力下离心 10 分钟，尽可能的倒干上清，收集菌体。

2. 用 8ml 溶液 P1 重悬菌体沉淀，可用吸头反复吹打或涡旋振荡至彻底悬浮。（如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。）

3. 加 8ml 的溶液 P2，温和地上下翻转 4 -7 次使菌体充分裂解，室温放置 2-3 分钟。（温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组 DNA 剪切断裂！所用时间不应超过 5 分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠，如果菌体少，很快清亮粘稠后就可以做下一步。）

4. 加 8ml 溶液 P3，立即温和地上下翻转 4 -7 次，中和完全后会出现黄色絮状沉淀。（中和完全后溶液完全呈现为黄色），在≥ 3,400 x g 离心力下离心 5 分钟。

5. 将一个 50ml 离心管放在离心管架子上准备收集过滤液，然后把注射器下端的接头拧开并将上一步混合物慢慢倒入注射器内，将注射器推杆推入注射器内慢慢推动收集过滤液（大约会收集到 20ml 左右的过滤液）。

6. 然后在过滤液中加入 8ml 质粒 DNA 结合液，盖上盖子颠倒 10 次左右使其混匀。以下步骤可以通过真空负压的方式也可以通过离心的方式进行操作

负压操作步骤：

1．确认 5 号柱 PS（连接 15ml 和 50ml 套筒）连接紧密后放置在负压多连器上，倒入第 6 步的混合液，打开真空开关使液体完全通过柱子。

2．去掉 50ml 套筒。

3．关掉真空开关，倒入 2ml 质粒 DNA 洗涤液 1，打开真空开关，让液体完全通过 5 号柱 PS。

4．关掉真空开关，加入 2ml 质粒 DNA 洗涤液 2（请先检查是否已加入无水乙醇!），打开真空开关，让液体完全通过 5 号柱 PS。

5．重复第 4 步。

6．将 5 号柱 PS 套在 2ml 收集管上，然后放置在台式离心机上在≥ 10,000 x g 条件下空转 2 分钟以去除残留乙醇。

7．将 5 号柱 PS 套在一个干净的 1.5ml 离心管内，添加 200-400µl 的质粒 DNA 洗脱液到柱基质上。（洗脱液事先在 65-70℃水浴中预热，洗脱效果更好），室温放置 2 分钟，在≥ 10,000 x g 条件下离心 1 分钟来洗脱质粒 DNA。推荐：将洗脱后的质粒 DNA 从新加回到柱基质上，进行二次洗脱可以提高产量。如需要浓度较高的质粒 DNA 推荐添加 200µl 的质粒 DNA 洗脱液。

8. 将内毒素去除柱套在一个干净的 1.5ml 离心管内。将上一步洗脱下来的质粒 DNA 全部加到去除柱内, 室温下放置 2 分钟，在 5,000 x g 的离心力下离心 1 分钟洗脱无内毒素的质粒 DNA 。

离心操作步骤：

1．确认 5 号柱 PS（连接 15ml 套筒）连接紧密后放置在一个 50ml 离心管里，倒入 10ml 第 6 步的混合液，500 x g 离心力下离心 2 分钟，倒掉离心管中的废液，重复此步骤直到混合液全部通过 5 号柱 PS。

2．加入 2ml 质粒 DNA 洗涤液 1 到 5 号柱 PS 内，500 x g 离心力下离心 2 分钟，弃废液。

3．加入 2ml 质粒 DNA 洗涤液 2（请先检查是否已加入无水乙醇!），500 x g 离心力下离心 2 分钟，弃掉废液。

4．重复第 3 步。

5．去掉 15ml 套筒，并将 5 号柱 PS 套入到收集管内。然后放置在台式离心机上在 ≥ 10,000 x g 条件下空转 2 分钟以去除残留乙醇。

6．将 5 号柱 PS 套在一个干净的 1.5ml 离心管内，添加 200-400µl 的质粒 DNA 洗脱液到柱基质上。（洗脱液事先在65-70℃水浴中预热，洗脱效果更好），室温放置 2 分钟，在≥ 10,000 x g 条件下离心 1 分钟来洗脱质粒 DNA。

7.推荐：将洗脱后的 DNA 加回到柱基质上，进行二次洗脱可以提高产量。如需要浓度较高的质粒 DNA 推荐添加 200µl 的质粒 DNA 洗脱液。

8. 将内毒素去除柱套在一个干净的 1.5ml 离心管内。将上一步洗脱下来的质粒 DNA 全部加到去除柱内, 室温下放置 2 分钟，在 5,000 x g 的离心力下离心 1 分钟洗脱无内毒素的质粒 DNA