产品系列
大肠杆菌DNA聚合酶
大肠杆菌DNA聚合酶I，可以在单链DNA模板和与其配对的引物存在的条件下，催化5'→3'方向的DNA合成[1]。同时还具备双链DNA缺刻(nick)处特异性的5'→3'外切酶活性、单链特异性的3'→5'外切酶活性以及核糖核酸酶H活性[2]。本品的DNA合成酶活性和双链DNA缺刻(nick)处特异性的5'→3'外切酶活性，可以实现缺刻处3'-OH起始的DNA合成和5'端单链DNA的降解，实现缺口平移。此聚合酶的单链特异性的3'→5'外切酶活性可以起到DNA合成的校验作用(proofreading)。在有dNTP存在的情况下，更多地表现为DNA聚合酶活性；而当dNTP不存在的情况下，更多表现为单链特异性的外切酶活性，例如可以表现为平末端双链DNA中的任一条链的5'端的5'→3'外切酶活性。
- 商品名称： 大肠杆菌DNA聚合酶
- 产品描述
- 产品说明
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格 RTBR23-069 大肠杆菌DNA聚合酶 1000U 409.00元 大肠杆菌DNA聚合酶I，可以在单链DNA模板和与其配对的引物存在的条件下，催化5'→3'方向的DNA合成[1]。同时还具备双链DNA缺刻(nick)处特异性的5'→3'外切酶活性、单链特异性的3'→5'外切酶活性以及核糖核酸酶H活性[2]。本品的DNA合成酶活性和双链DNA缺刻(nick)处特异性的5'→3'外切酶活性，可以实现缺刻处3'-OH起始的DNA合成和5'端单链DNA的降解，实现缺口平移。此聚合酶的单链特异性的3'→5'外切酶活性可以起到DNA合成的校验作用(proofreading)。在有dNTP存在的情况下，更多地表现为DNA聚合酶活性；而当dNTP不存在的情况下，更多表现为单链特异性的外切酶活性，例如可以表现为平末端双链DNA中的任一条链的5'端的5'→3'外切酶活性。
用途：DNA合成；双链DNA 5'突出末端(5' overhang)的补平；双链DNA 3'突出末端(3' overhang)的削平；cDNA第二条链合成[4]；与DNase I一起使用，进行DNA切口平移；DNA的切口翻译以获得具有高比活性的探针。
包装清单：
产品编号 产品名称 包装 1 E.coli DNA Polymerase I (10U/μl) 100μl 2 10X Reaction Buffer 400μl － 说明书 1份 保存条件：
-20ºC保存，两年有效。注意事项：
1.由于本品具有外切酶活性，在进行反应前应尽量避免环境温度偏高导致的DNA链被切除。
2.本品不具有内切酶活性，且本产品不包含DNase I，进行切口翻译反应时必须另外添加DNase I。
3.对本品剧烈震荡或搅拌会使酶失活。
4.本品与DNA的亲和力较高，加入过量的酶易发生凝集作用(Aggregation)，影响反应的进行。
5.本品可使用带修饰的核苷酸(例如生物素、地高辛、荧光标记核苷酸)作为DNA合成的底物，以用于DNA探针的标记。
6.酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
7.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
8.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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使用说明：
1. 双链DNA 5'突出末端(5' overhang)的补平：
a. 对于双链DNA 5'突出末端(5' overhang)的补平，参考下表在冰浴中配制反应体系(以20μl体系为例)。Reagent Volume Final Concentration Nuclease-Free Water (16-x)μl - dsDNA with 5' overhang xμl ~0.5µM or 5-200ng/µl 10X Reaction Buffer 2μl 1X dNTP Mix (2mM each) 1μl 100μM E.coli DNA Polymerase I (10U/µl) 1μl 0.5U/µl Total Volume 20μl - 注1：在进行末端补平实验时可适当减少酶量，避免在外切酶活性的作用下导致模板的缺失。
注2：如果同时进行多个反应，可以把上表中除dsDNA with 5' overhang之外的所有溶液和酶提前混合，分装到各反应管，最后再加入dsDNA with 5' overhang。
注3：dsDNA with 5' overhang如果是寡核苷酸，最终浓度可以约为0.5µM；如果是消化后的DNA质粒等最终浓度可以约为5-200ng/μl。
b. 按上表设置好反应体系后，适当轻轻混匀反应体系，随后低速离心以使粘附在管壁上的液体沉淀至管底。
c. 反应条件：37ºC孵育20分钟。注：反应时间可以根据实际情况酌情适当调节。
d. 终止反应：75ºC孵育20分钟使E.coli DNA Polymerase I失去活性。
2. 双链线性DNA的消化：
a. 对于双链线性DNA消化，参考下表在冰浴中配制如下反应体系(以20μl体系为例)。Reagent Volume Final Concentration Nuclease-Free Water (17-x)μl - dsDNA xμl ~0.5µM or 5-200ng/µl 10X Reaction Buffer 2μl 1X E.coli DNA Polymerase I (10U/µl) 1μl 0.5U/µl Total Volume 20μl - 注：如果同时进行多个反应，可以把上表中除dsDNA之外的所有溶液和酶提前混合，分装到各反应管，最后再加入dsDNA。
b. 按上表设置好反应体系后，适当轻轻混匀反应体系，随后低速离心以使粘附在管壁上的液体沉淀至管底。
c. 反应条件：37ºC孵育20分钟。注：反应时间可以根据实际情况酌情适当调节。
d. 终止反应：75ºC孵育20分钟使聚合酶失去活性。
3. 其它用途可以参考适当的文献资料进行。
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