MTT细胞增殖及毒性检测试剂盒

本试剂盒以MTT（高纯度）作为指示剂，在经典操作步骤的基础上，采用独特的甲臜溶解液配方，可以直接溶解甲臜沉淀，无需去除原有的培养液。从而避免因去除培养液时甲臜被部分去除而引起的操作误差。具有本底低，灵敏度高，线性范围宽，操作简单等特点。另外，本试剂盒还提供配套的一次性针头过滤器和注射器，为实验带来更多的便利。

商品名称： MTT细胞增殖及毒性检测试剂盒
商品编号： RTBR23-066

所属分类：

细胞检测试剂盒

产品咨询：

025-85800066

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产品描述
产品说明

产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
RTBR23-066	MTT细胞增殖及毒性检测试剂盒	500T	220.00元

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	500T	1000T	5000T
A	MTT粉末	25 mg	50 mg	250 mg
B	MTT溶剂	5 mL	10 mL	50 mL
C	甲臜溶解液	50 mL	100 mL	100 mL×5
D	除菌套装	1包	1包	1包

运输和保存方法

冰袋运输。

收到产品后，取出除菌套装室温保存，其他组分4℃保存。甲臜溶解液也可以放到室温保存。一年有效。

注意事项

1）甲臜溶解液具有腐蚀性和毒性，使用时注意防护。

2）MTT有致癌性，应小心操作；MTT溶液需要无菌，因其对菌很敏感。MTT溶液不可4℃保存超过1周，因其可能发生降解，导致检测结果错误。

3）MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在0-0.7范围内。

4）使用微孔板进行检测，如果细胞培养时间比较长，需要注意蒸发的问题。一般情况，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，建议弃用周围一圈的方法，改加PBS，水或者细胞培养液等。也可通过将96孔板放在靠近培养箱内水源的位置，以减缓蒸发现象。

5）甲臜溶解液低温或者常温保存可能会产生沉淀，只需37℃水浴使其充分溶解，混匀后即可使用。

6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
7）本产品仅作科研用途！

使用方法（以96孔板为例）

细胞生长的培养条件会影响检测效果，因此进行MTT检测时需考虑这些条件，包括：培养时间，传代次数以及生长培养基的成分等。一般情况，48-72 h培养时间下，最初铺板的细胞密度可控制在5×10³~5×10⁴/100 μL。也可根据细胞大小，增殖速度的快慢来优化最初的细胞铺板密度以及培养时间。

注意：1）最终检测的培养液内含有酚红会严重影响检测结果。推荐MTT检测时细胞培养在无酚红环境下。也可以在进行MTT孵育的时候改用无酚红培养液。2）每次实验都要设置空白对照孔（不含细胞）。对于细胞毒性试验，还要设置未经药物处理的细胞孔，此对照孔的吸光度范围一般控制在0.75-1.25之间；每个样品孔建议做三个平行。

A．实验前试剂准备

1. MTT溶液

用5 mL MTT溶剂直接溶解25mg MTT粉末配制成5 mg/mL的工作液，用试剂盒内提供的除菌套装以除去溶液中的细菌，该溶液可4℃ 避光短时间保存（越短越好）。建议溶解后，直接将剩余液体小剂量分装放到-20℃保存，避免反复冻融，6个月稳定。

2）甲臜溶解液（MTT终止液）

甲臜溶解液低温或者常温保存可能会产生沉淀，只需37℃水浴使其充分溶解，混匀后即可使用。

B．MTT细胞增殖检测

1）接种细胞：用含10%胎牛血清（FBS）的培养液配制成单个细胞悬液，调整细胞密度，以每孔5×10³~5×10⁴个细胞接种到96孔板，每孔体积100 µL，培养板的边缘孔用无菌PBS，水或者培养液填充。设置空白对照孔（不含有细胞）。

2）37℃，5% CO₂，培养24-72 h。

3）可选：对于贴壁细胞，去除旧的培养液，更换100 µL/孔新鲜的培养液（不含酚红）；对于悬浮细胞，离心96孔板，去除尽可能多的上清液。然后加入100 µL/孔新鲜的培养液（不含酚红）重悬细胞；

4）每孔加入10 µL MTT工作液（5 mg/mL），加样时尽量勤换枪头，控制加量误差。

5）水平摇床上低速混匀1 min后，放入37℃培养箱孵育4h。注：对于高密度的细胞（>100,000 cells/孔）可缩短孵育时间至2 h。

6）对于贴壁细胞，直接吸掉旧的培养液，避免枪尖刮破单细胞层。对于悬浮细胞，离心收集细胞，去除培养液。

7）加入100 µL/孔甲臜溶解液，用枪充分混匀后放入37℃培养箱孵育4 h。注：更长的孵育时间会降低检测灵敏度。

8）孵育结束，放置在酶标仪上摇匀后，选择570 nm，测定吸光度。记录结果，比色以空白调零。如果无570 nm滤光片，可以使用560-600 nm滤光片。

注：对于细胞毒性检测，以未经药物处理细胞的OD值为100%，然后计算药物处理细胞所占的比率（x），公式如下：OD（未处理细胞）/OD（药物处理细胞）=100%/x。然后建立直方图。